南宫28四环素类检测试剂盒（酶联免疫法）使用说明书

1. 原理及用途

本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，专门用于检测组织、蜂蜜和鸡蛋等样本中的四环素类药物（Tetracyclines，TCs）。试剂盒包含预包被偶联抗原的酶标板、辣根酶标记物、抗体、标准品及其他配套试剂。检测过程中，加入标准品或样品溶液，样本中的四环素类药物与酶标板上的偶联抗原竞争抗体，当加入酶标记物后，通过TMB底物显色，样本的吸光度值与其四环素类药物的含量呈负相关，通过与标准曲线比较，即可得出样本中四环素类药物的残留量。

2. 技术指标

2.1 灵敏度

0.05 ppb (ng/ml)

2.2 反应模式

37℃，反应时间分为30min、30min及15min

2.3 检测下限

组织、肝脏、鸡蛋：2 ppb
蜂蜜：2 ppb
尿样：0.5 ppb
牛奶：2 ppb
奶粉：4 ppb

2.4 交叉反应率

四环素：100%
强力霉素：70%
金霉素：10%
土霉素：10%

2.5 样本回收率

组织：85±20%
肝脏、鸡蛋：75±20%
蜂蜜：85±20%
尿样：80±20%
牛奶、奶粉：75±20%

3. 试剂盒组成

酶标板：96孔
高浓度标准品溶液（1瓶）：100 ppb（高标准液需注意密封）
标准品溶液：0 ppb、0.05 ppb、0.1 ppb、0.2 ppb、0.4 ppb、0.8 ppb（均为空瓶现配）
酶标记物（红盖）：11 ml
抗体工作液（蓝盖）：55 ml
底物液A（白盖）：6 ml
底物液B（黑盖）：6 ml
终止液（黄盖）：6 ml
20×浓缩洗涤液（白盖）：40 ml
5×复溶液（黄盖）：50 ml
说明书：1份
盖板膜：1张
自封袋：1个

4. 需要的器材和试剂

4.1 仪器

酶标仪、打印机、均质器、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平（感量0.01 g）

4.2 微量移液器

单道20µl-200µl、100µl-1000µl，多道300µl

4.3 试剂

浓盐酸、无水甲醇

5. 样本前处理

5.1 样本处理前须知

实验器具需完全洁净，并使用一次性吸头以避免污染。

5.2 配液

配液1：复溶液将5×复溶液用去离子水稀释5倍（1份5×复溶液加4份去离子水），可在4℃下保存一个月。
配液2：工作洗涤液将浓缩洗涤液20倍稀释（1份洗涤液加19份去离子水）。
配液3：样本提取液取43 mL浓盐酸加去离子水混匀，定容至50 mL，再加入450 mL无水甲醇。

5.3 样本前处理步骤

1. 组织、肝脏、鸡蛋样本处理：称取1±0.05 g均质样本于离心管中，加入2 mL样本提取液（配液3），剧烈振荡2 min，4000转/分离心5 min；取50 µl上层液，加入950 µl复溶液混匀；取50 µl用于分析。样本稀释倍数：40，检测下限：2 ppb。

2. 蜂蜜样本处理：称取1±0.05 g蜂蜜样本于离心管中，加入1 mL样本提取液（配液3），振荡混匀2 min；取50 µl混合液，加入950 µl复溶液混匀；取50 µl用于分析。样本稀释倍数：40，检测下限：2 ppb。

3. 尿样本处理：用复溶液将尿样10倍稀释，需过滤。取50 µl稀释样本用于分析。样本稀释倍数：10，检测下限：0.5 ppb。

4. 牛奶样本处理：吸取1 mL牛奶于离心管中，加2 mL样本提取液（配液3），振荡2 min；取50 µl上层液，加入950 µl复溶液混匀；取50 µl用于分析。样本稀释倍数：40，检测下限：2 ppb。

5. 奶粉样本处理：称取1±0.05 g奶粉于离心管中，加入4 mL样本提取液（配液3），振荡2 min；取50 µl上层液，加入950 µl复溶液混匀；取50 µl用于分析。样本稀释倍数：80，检测下限：4 ppb。

6. 酶联免疫试验步骤

将所需试剂从4℃冷藏取出，置于室温下平衡30 min，每种液体试剂使用前均须摇匀。取出所需数量的微孔板，并将未使用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。实验开始前需配制标准品应用液。标准液的制作步骤详见说明书。

7. 结果分析

7.1 百分吸光率的计算

标准液或样本的百分吸光率等于其平均吸光度值除以0 ppb标准液的吸光度值，再乘以100%。

7.2 标准曲线的绘制与计算

以标准液的百分吸光率为纵坐标，标准液浓度的对数为横坐标，绘制半对数曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中，得到样本的实际浓度。

8. 注意事项

1. 室温低于25℃或试剂及样本未回到室温会影响结果。
2. 洗板过程中应避免孔内干燥，以保持标准曲线线性。
3. 混合应均匀，洗板要彻底，以提高实验的重现性。
4. 在孵育期间，需用盖板膜封住微孔板，避免光照。
5. 不要使用过期或不同批号的试剂盒中的试剂。

9. 贮藏及保存期

储藏条件：试剂盒应在2-8℃保存，避免冷冻。
保质期：产品有效期为1年，详情见包装盒。

选择南宫28，助您在生物医疗领域取得优异成果！