细胞状态如何？在南宫28的培养标准中，理想的细胞传代条件是70-90%的汇合度，细胞形态为梭形或多边形，且具有透亮的外观。密度过低会导致细胞“饥饿”，而密度过高会让细胞变形，因此确保适当的细胞密度至关重要。我们的操作环境需要完备的准备：37℃预热的胰酶、PBS、新鲜培养基、无菌离心管和酒精灯等一应俱全。缺一不可，务必保持无菌的实验氛围。

首先，对操作台进行消毒，使用75%酒精擦拭三遍，并在紫外灯下照射30分钟。穿好手套和口罩，确保无菌环境。接下来，第一步是轻拍培养瓶，温柔弃去旧培养基，同时倾斜瓶身让废液顺滑进入废液缸，整个过程要快速且优雅。第二步，用PBS清洗，缓慢沿瓶壁注入PBS，轻轻摇晃两圈以去除残余的血清，倒掉时要小心，留意不要冲走细胞。

第三步，精准加入预热至37℃的胰酶，确保胰酶均匀覆盖细胞层，然后将培养瓶放回培养箱中孵育1至5分钟。一旦显微镜下观察到细胞开始变圆和边缘卷起，务必立即终止孵育，拖延可能会危害细胞生存。第四步，将新鲜培养基以两倍体积快速倒入，血清会立即中和胰酶，随后使用移液枪轻柔吹打10至15次，瞬间让细胞释放为“细胞雨”。

第五步，进行离心操作，在1000rpm下离心5分钟，上清液优雅倒出，管底的沉淀如“细胞小丸子”，轻轻弹打管壁使其松散。第六步，将细胞以1:2至1:5的比例稀释至新培养瓶内，轻轻摇匀，让细胞“躺平”，然后放回37℃、5% CO₂的培养箱中，1至2小时后补加新鲜培养基，整个过程充满仪式感。24小时后可通过显微镜观察贴壁情况，若有漂浮的细胞，可能是消化过度或接种密度过低造成的。

在48小时时更换新鲜培养基，如颜色变黄则说明细胞代谢活跃，需要及时补充营养。72小时后记录细胞的生长曲线和形态变化，若发现异常，需立即排查是否有污染或培养条件不当的问题。如果细胞聚集不分散，可能是吹打时力度过大或胰酶使用量不足，可以尝试下次加入一个“轻柔吹打20次”的步骤。如果贴壁率低于50%，要检查培养瓶是否经过包被以及血清批次是否稳定，必要时使用多聚赖氨酸作为“防滑垫”。如果传代后细胞大量死亡，可能是离心转速过高或时间过长，要降低到800rpm和3分钟以尝试“温柔离心术”。在南宫28的指导下，实验操作能更规范、更有效。